PCR實(shí)驗方法步驟:
方法
1:在冰浴中,按以下次序將各成分加入一無(wú)菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer
5 μl dNTP mix (2mM)
4 μl 引物1(10pM)
2 μl 引物2(10pM)
2 μl Taq酶 (2U/μl)
1 μl DNA模板(50ng-1μg/μl)
1 μl 加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無(wú)熱蓋,不加或添加石蠟油。
2:調整好反應程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執行擴增。一般:在93℃預變性3-5min,進(jìn)入循環(huán)擴增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,在72℃ 保7min。
3:伴放線(xiàn)放線(xiàn)桿菌探針?lè )晒舛?/span>PCR試劑盒結束反應,PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長(cháng)期保存。
4:PCR的電泳檢測:如在反應管中加有石蠟油,需用100μ進(jìn)行抽提反應混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。
產(chǎn)品名稱(chēng) | 英文名稱(chēng) | 貨號 |
病毒PCR檢測試劑盒說(shuō)明書(shū) | BKP4558 |
技術(shù)服務(wù)內容:
實(shí)驗步驟包括RNA提取、反轉錄、PCR和瓊脂糖凝膠電泳,以軟件分析電泳條帶的灰度值(IOD值),通過(guò)與內參基因的灰度值比較,判斷目的mRNA的相對表達量。
特點(diǎn)優(yōu)勢:
1. 特異性:病毒PCR檢測試劑盒說(shuō)明書(shū)使用的引物均經(jīng)過(guò)詳盡的生物信息學(xué)分析,經(jīng)過(guò)GenBank及自建龐大數據庫的比對,確保所用的每一條引物均為種屬或血清型特異的基因序列區段,可實(shí)現對細菌種屬及血清型的特異檢測,特異性均達到100%。
2. 重現性:該系列所有產(chǎn)品均經(jīng)過(guò)大量實(shí)驗菌株的驗證,重現性為100%。
3. 靈敏性:該系列產(chǎn)品可實(shí)現對檢測菌的高靈敏檢測,當樣品中細菌的濃度達到103cfu/ml時(shí),可實(shí)現對其的直接檢測,無(wú)需繁瑣的增菌過(guò)程。
4. 實(shí)用性:檢測范圍廣,涵蓋了對人體危害較為嚴重的17種及腸道致病菌,可實(shí)現對臨床樣品及其他環(huán)境取樣的快速檢測,整個(gè)檢測過(guò)程為3-4個(gè)小時(shí)。
5. 優(yōu)勢1:序列資源豐富,除GenBank公布的序列外,公司還進(jìn)行了大量菌株的序列破譯,從理論上保證所選引物具有良好的保守性和特異性。6. 優(yōu)勢2:該系列試劑盒均經(jīng)過(guò)大量的保守性及特異性實(shí)驗驗證,憑借公司擁有的豐富的菌種資源,每一種檢測試劑盒均經(jīng)過(guò)了20余種標準菌株和臨床菌株的保守性驗證及40余種近緣標準菌株和臨床菌株的特異性驗證,確保在使用過(guò)程中不會(huì )出現任何的假陽(yáng)性及假陰性報告結果。本產(chǎn)品只適用于科研,不能用于臨床診斷。
cis-Octahydro-isoindole 中文名: 分子式:C8H15N 度:98.0% 小鼠16α羥基雌1(16-αOHE-1)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
2-Benzylsuccinic acid 中文名: 分子式:C11H12O4 度:98.0% 小鼠15脂加氧酶(15-LO/LOX)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
3-(tert-Butoxycarbonyl)-2,2-dimethyl-4-phenyloxazolidine-5-carboxylic acid 中文名: 分子式:C17H23NO5 度:98.0% 小鼠11β羥基類(lèi)固醇脫氫酶(11β-HSD)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
Atorvastatin calcium 中文名:阿托伐他汀鈣 分子式:C33H35FN2O5 度:98.0% 小鼠1,4,5-三0酸肌醇(IP3)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
(2R,3S)-3-Phenylisoserine ethyl ester 中文名: 分子式:C11H15NO3 度:98.0% 小鼠1,3-βD葡葡糖苷酶(1,3-βDglucosidase)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
小鼠β甘露糖苷酶elisa試劑盒 小鼠β甘露糖苷酶試劑盒 規格型號:96T/48T 小鼠β甘露糖苷酶試劑盒,規格型號:96T/48T,來(lái)源:elisa試劑盒(分裝),產(chǎn)品別名:小鼠β甘露糖苷酶試劑盒、小鼠β甘露糖苷酶eisa試劑盒 保存條件:2-8℃ 保質(zhì)期:6個(gè)月。 Ketoprofen 22071-15-4 中文名:酮基布洛芬 分子式:C16H14O3
小鼠β甘露糖苷酶(βManase)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝 Bisoprolol fumarate 中文名:富馬酸比索洛爾 分子式:C22H35NO8 度:98.0%
小鼠β甘露糖苷酶(βManase)ELISAKit ELISA. 96T/48T Bis(4-hydroxy-3,5-dimethylphenyl) sulfone 中文名:雙(4-羥基-3,5-二甲苯基)砜 分子式:C16H18O4S 度:98.0%
小鼠β酚(β-Nph)ELISAKit ELISA. 96T/48T N-(2-methyl-4-oxopentan-2-yl)-sulfamethoxazole 中文名: 分子式:C16H21N3O4S
小鼠β酚(β-naphthol)LISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝 Bisphenol P 中文名:雙酚P 分子式:C24H26O2
病毒PCR檢測試劑盒說(shuō)明書(shū)HA Others H5N1 甲型 H5N1 (A/bar-headed goose/Qinghai/14/2008) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 桿狀病毒-昆蟲(chóng)細胞裂解液 (陽(yáng)性對照) D-丙氨酸甲酯鹽酸鹽質(zhì)量規格:0.98D-Alanine Methyl Ester Hydrochloride
人臍動(dòng)脈平滑肌細胞cDNAHUASMC cDNAD-丙氨酸叔丁酯鹽酸鹽質(zhì)量規格:0.99D-Alanine tert-Butyl Ester Hydrochloride
V79細胞,中國倉鼠肺細胞 人亞歷山大細胞系,PLC/PRF/5細胞 膀胱上皮細胞Many types of cells包裝:5 × 105方(1ml)D-精氨酸質(zhì)量規格:0.98D-Arginine
猞猁皮膚成纖維樣細胞;ELS1D-核糖-5-1酸二鈉鹽質(zhì)量規格:>85%,D-Ribose 5-phosphate di salt hydrate
VCAM1 Others Human 人 CD106 / VCAM1 人細胞裂解液 (陽(yáng)性對照) 蘇木色精,蘇木素質(zhì)量規格:進(jìn)分Hematoxylin
恒河猴腎細胞;LLC-MK2亞甲基二水楊酸(異構體的混合物)(>90.0%(T))質(zhì)量規格:>90.0%(T)Methylenedisalicylic Acid (mixture of isomers)
大鼠腎上腺嗜鉻細胞瘤細胞(低分化);PC-12(低分化) 細胞,BEL-7402細胞 D3細胞,129小鼠ES細胞2-氨基-2',5-二氯二苯甲酮(>98.0%(N))質(zhì)量規格:>98.0%(N)2-Amino-2',5-dichlorobenzophenone
MiaPaCa-2, 人細胞 Human4-1丙氧基-2-羥基二苯甲酮(>97.0%(HPLC)(T))質(zhì)量規格:>97.0%(HPLC)(T)4-Allyloxy-2-hydroxybenzophenone
CST4 Others Human 人 CST4 / Cystatin-4 / Cystatin-S 人細胞裂解液 (陽(yáng)性對照) 3,3',4,4'-二苯酮四羧酸二酐(>96.0%(T))質(zhì)量規格:>96.0%(T)3,3',4,4'-Benzophenonetetracarboxylic Dianhydride
人無(wú)色素睫狀上皮細胞 cDNAHNPCEpiC cDNA10-去乙酰巴卡丁III質(zhì)量規格:10-Deacetylbaccatin-III
反應五要素:
參加PCR反應的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物:引物是PCR特異性反應的關(guān)鍵,PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補的程度。理論上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其設計互補的寡核苷酸鏈做引物,利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴增。設計引物應遵循以下原則:
①引物長(cháng)度: 15-30bp,常用為20bp左右。
②引物擴增跨度: 以200-500bp為宜,特定條件下可擴增長(cháng)至10kb的片段。
③引物堿基:G+C含量以40-60%為宜,G+C太少擴增效果不佳,G+C過(guò)多易出現非特異條帶。ATGC*隨機分布,避免5個(gè)以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內部出現二級結構,避免兩條引物間互補,特別是3'端的互補,否則會(huì )形成引物二聚體,產(chǎn)生非特異的擴增條帶。
⑤引物3'端的堿基,特別是最末及倒數*個(gè)堿基,應嚴格要求配對,以避免因末端堿基不配對而導致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點(diǎn), 被擴增的靶序列*有適宜的酶切位點(diǎn), 這對酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性:引物應與核酸序列數據庫的其它序列無(wú)明顯同源性。
引物量:每條引物的濃度0.1~1umol或10~100pmol,以*引物量產(chǎn)生所需要的結果為好,引物濃度偏高會(huì )引起錯配和非特異性擴增,且可增加引物之間形成二聚體的機會(huì )。