技術(shù)服務(wù)內容:
實(shí)驗步驟包括RNA提取、反轉錄、PCR和瓊脂糖凝膠電泳,以軟件分析電泳條帶的灰度值(IOD值),通過(guò)與內參基因的灰度值比較,判斷目的mRNA的相對表達量。
產(chǎn)品名稱(chēng) | 英文名稱(chēng) | 貨號 |
核酸釋放劑(DNA-RNA通用型) | BKP6211 |
PCR實(shí)驗方法步驟:
方法
1:在冰浴中,按以下次序將各成分加入一無(wú)菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer
5 μl dNTP mix (2mM)
4 μl 引物1(10pM)
2 μl 引物2(10pM)
2 μl Taq酶 (2U/μl)
1 μl DNA模板(50ng-1μg/μl)
1 μl 加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無(wú)熱蓋,不加或添加石蠟油。
2:調整好反應程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執行擴增。一般:在93℃預變性3-5min,進(jìn)入循環(huán)擴增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,在72℃ 保7min。
3:伴放線(xiàn)放線(xiàn)桿菌探針?lè )晒舛縋CR試劑盒結束反應,PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長(cháng)期保存。
4:PCR的電泳檢測:如在反應管中加有石蠟油,需用100μ進(jìn)行抽提反應混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。
特點(diǎn)優(yōu)勢:
1. 特異性:核酸釋放劑(DNA-RNA通用型)使用的引物均經(jīng)過(guò)詳盡的生物信息學(xué)分析,經(jīng)過(guò)GenBank及自建龐大數據庫的比對,確保所用的每一條引物均為種屬或血清型特異的基因序列區段,可實(shí)現對細菌種屬及血清型的特異檢測,特異性均達到100%。
2. 重現性:該系列所有產(chǎn)品均經(jīng)過(guò)大量實(shí)驗菌株的驗證,重現性為100%。
3. 靈敏性:該系列產(chǎn)品可實(shí)現對檢測菌的高靈敏檢測,當樣品中細菌的濃度達到103cfu/ml時(shí),可實(shí)現對其的直接檢測,無(wú)需繁瑣的增菌過(guò)程。
4. 實(shí)用性:檢測范圍廣,涵蓋了對人體危害較為嚴重的17種及腸道致病菌,可實(shí)現對臨床樣品及其他環(huán)境取樣的快速檢測,整個(gè)檢測過(guò)程為3-4個(gè)小時(shí)。
5. 優(yōu)勢1:序列資源豐富,除GenBank公布的序列外,公司還進(jìn)行了大量菌株的序列破譯,從理論上保證所選引物具有良好的保守性和特異性。6. 優(yōu)勢2:該系列試劑盒均經(jīng)過(guò)大量的保守性及特異性實(shí)驗驗證,憑借公司擁有的豐富的菌種資源,每一種檢測試劑盒均經(jīng)過(guò)了20余種標準菌株和臨床菌株的保守性驗證及40余種近緣標準菌株和臨床菌株的特異性驗證,確保在使用過(guò)程中不會(huì )出現任何的假陽(yáng)性及假陰性報告結果。
反應五要素:
參加PCR反應的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物:引物是PCR特異性反應的關(guān)鍵,PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補的程度。理論上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其設計互補的寡核苷酸鏈做引物,利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴增。設計引物應遵循以下原則:
①引物長(cháng)度: 15-30bp,常用為20bp左右。
②引物擴增跨度: 以200-500bp為宜,特定條件下可擴增長(cháng)至10kb的片段。
③引物堿基:G+C含量以40-60%為宜,G+C太少擴增效果不佳,G+C過(guò)多易出現非特異條帶。ATGC*隨機分布,避免5個(gè)以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內部出現二級結構,避免兩條引物間互補,特別是3'端的互補,否則會(huì )形成引物二聚體,產(chǎn)生非特異的擴增條帶。
⑤引物3'端的堿基,特別是最末及倒數*個(gè)堿基,應嚴格要求配對,以避免因末端堿基不配對而導致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點(diǎn), 被擴增的靶序列*有適宜的酶切位點(diǎn), 這對酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性:引物應與核酸序列數據庫的其它序列無(wú)明顯同源性。
引物量:每條引物的濃度0.1~1umol或10~100pmol,以*引物量產(chǎn)生所需要的結果為好,引物濃度偏高會(huì )引起錯配和非特異性擴增,且可增加引物之間形成二聚體的機會(huì )。
檸檬酸三甲酯(>98.0%(GC)) Trimethyl 質(zhì)量規格:>98.0%(GC) 英文名稱(chēng)HumanCINC-2a/bELISAKit人CINC-2a/b規格:96T/48T
檸檬酸三丙酯(>97.0%(T)) Tripropyl 質(zhì)量規格:>97.0%(T) 英文名稱(chēng)HumanCINC-3ELISAKit人CINC-3規格:96T/48T
N-丁基苯磺酰胺(>98.0%(HPLC)(N)) N-Butylbenzenesulfonamide 質(zhì)量規格:>98.0%(HPLC)(N) 英文名稱(chēng)HumanCKMBELISAKit人激動(dòng)異構酶MB(CKMB)規格:96T/48T
D-(+)-樟腦(>98.0%(GC)) (+)-Camphor 質(zhì)量規格:>98.0%(GC) 英文名稱(chēng)HumanCoicoseroneELISAKit人皮質(zhì)同(Coicoserone)規格:96T/48T
阿卡波糖十三醋酸酯 Acarbose Tridecaacetate 質(zhì)量規格:美國進(jìn)口 英文名稱(chēng)HumanCoisolELISAKit人皮質(zhì)醇(Coisol)ELISAKit規格:96T/48T
阿昔洛韋鈉鹽 Acyclovir 質(zhì)量規格:美國進(jìn)口 英文名稱(chēng)HumanCollageypeIELISAKit人I型膠原(CollageypeI)規格:96T/48T
阿昔洛韋單鹽 Acyclovir Monophosphate 質(zhì)量規格:美國進(jìn)口 英文名稱(chēng)HumanCollageypeIIELISAKit人II型膠原(CollageypeII)ELISAKit規格:96T/48T
阿昔洛韋-d4 Acyclovir-d4 質(zhì)量規格:美國進(jìn)口 英文名稱(chēng)HumanCollageypeIIIELISAKIT人III型膠原(Collagen)ELISAKIT規格:96T/48T
N2-乙?;?/span>-9-(2-乙酰氧基乙氧基甲基)鳥(niǎo)嘌呤(阿昔洛韋雜質(zhì)) N2-Acetyl-9-(2-acetoxyethoxymethyl)guanine (Acyclovir Impurity) 質(zhì)量規格:美國進(jìn)口 英文名稱(chēng)HumanconnectivetissuegrowthfactorELISAKit人結締組織生長(cháng)因子(ctgf)ELISA試劑盒規格:96T/48T
腺苷3′,5′-環(huán)單硫代酯,8-氯-,Rp-異構體鈉鹽 Adenosine 3′,5′-cyclic Monophosphorothioate, 8-Chloro-, Rp-Isomer, Salt 質(zhì)量規格:美國進(jìn)口 英文名稱(chēng)HumanCPAFELISAKIT人衣原體蛋白酶樣活性因子(CPAF)規格:96T/48T
兔子纖溶酶原激活物抑制因子(PAI)ELISAKit Acetophenone tosylhydrazone 中文名:苯乙酮對甲苯磺?;?/span> 分子式:C15H16N2O2S 度:98.0%
核酸釋放劑(DNA-RNA通用型)兔子纖溶酶原激活物抑制因子(PAI)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝 1-chloro-6-(5-ethynylthiophen-2-yl)hexa-3,5-diyn-2-ol 中文名: 分子式:C12H7ClOS 度:%
兔子纖溶酶原elisa試劑盒 兔子纖溶酶原試劑盒 規格型號:96T/48T 兔子纖溶酶原試劑盒,規格型號:96T/48T,來(lái)源:elisa試劑盒(進(jìn)口分裝),產(chǎn)品別名:兔子纖溶酶原試劑盒、兔子纖溶酶原eisa試劑盒 保存條件:2-8℃ 保質(zhì)期:6個(gè)月。 Arbidol hydrochloride 131707-23-8 中文名:鹽酸阿比朵爾 分子式:C22H26BrClN2O3S